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當前位置:首頁  >  技術文章  >  葡萄糖檢測試劑盒(GOD-POD比色法)説明書

葡萄糖檢測試劑盒(GOD-POD比色法)説明書

更新時間:2024-06-28      點擊次數(shù):1153

葡萄糖檢測試劑盒(GOD-POD比色法)

一、產(chǎn)品簡介:

葡萄糖(Glucose,Dextrose,Glu)又稱玉米葡糖,簡稱葡糖,化學式C6H12O6,分子量為180.16,是自然界分布廣、最重要的一種單糖,屬于多羥基醛,用酶學方法測定葡萄糖是生化檢測中的常用方法,常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法,

上述酶學法特點是:

1、靈敏度、準確度、精密度均高;

2、使用溫和的反應條件;

3、對葡萄糖有專一性,不受其他糖及還原物的干擾;

4、操作簡便;

5、適用于自動分析儀。

雅吉生物葡萄糖檢測試劑盒(GOD-POD比色法)又稱葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等,其檢測原理是在葡萄糖氧化酶的催化下,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸,同時消耗溶液中的氧,產(chǎn)生的*與氧化色原物質反應生成紅色的醌類化合物,初始反應中*的生成量與葡萄糖濃度成正比,分光光度計505nm進行比色測定,專門用于人或動物的血清、血漿、腦脊液、細胞、組織等樣本中的葡萄糖含量定量測定,但不宜直接檢測尿液中的葡萄糖含量,其中Glu標準(5mmol/L)=90mg/dl。該試劑盒僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。。

 

二、產(chǎn)品組成:

名稱規(guī)格

100ml

存儲

試劑(A)酚試劑

100ml

RT避光

試劑(B)酶試劑

磷酸鹽、4-AAP、GODPOD

100ml

-20℃避光

臨用前,酚試劑:酶試劑等比例混勻,即GOD-POD工作液,4保存。

試劑(C)Glu標準(5mmol/L)

1.5ml

4℃

試劑(D)ddH2O

1.5ml

RT

使用說明書

一份

 

三、自備材料:

1、生理鹽水或PBS

2、離心管或96孔板

3、勻漿機、離心機

4、水浴鍋或恒溫箱

5、分光光度計、酶標儀、全自動或半自動生化分析儀

四、操作步驟(僅供參考)

1、樣本處理:

①血清、血漿、腦脊液樣品:從待測樣品中分離出的血清或血漿不應有溶血,直接測定,如超過線性范圍(30mmol/L),用生理鹽水或PBS稀釋后測定。

②細胞樣品:

a.取適量的細胞(一般推薦>106以上),1000g離心10min,棄上清,留取沉淀。b.用PBS或生理鹽水清洗1~2次,1000g離心10min,棄上清,留取沉淀。

c.加入200~300μl的PBS或生理鹽水勻漿,冰浴條件下超聲破碎細胞,功率300W,每次3~5s,間隔30s,重復3~5次;亦可手動勻漿,制備好的勻漿液不可離心;亦可用1~2%TritonX-100冰浴30~60min,制備好的裂解液不可離心。

③組織樣品:準確稱取適量組織樣品,按質量(g):生理鹽水或PBS(ml)=1:9的比例,加入生理鹽水或PBS,冰浴條件下手動或機械勻漿,2500~3000g離心10min,取上清。

2、Glu測定:

酶標儀、全自動生化分析儀Glu測定

加入物(μl)

空白孔

標準孔

測定孔

ddH2O

3

Glu標準(5mmol/L)

3

待測樣品

3

GOD-POD工作液

300

300

300

 

分光光度計(1ml比色杯)、半自動生化分析儀Glu測定

加入物(ml)

空白管

標準管

測定管

ddH2O

0.01

Glu標準(5mmol/L)

0.01

待測樣品

0.01

GOD-POD工作液

1

1

1

 

普通分光光度計(2ml比色杯)Glu測定

加入物(ml)

空白管

標準管

測定管

ddH2O

0.02

Glu標準(5mmol/L)

0.02

待測樣品

0.02

GOD-POD工作液

2

2

2

 

①各種儀器按上表依次加入試劑。

②充分混勻,37℃水浴中孵育15min。

③立即用相應儀器測定505nm處吸光度,以空白孔(管)調零,讀取標準孔(管)、測定孔(管)的吸光度,分別記為A標準、A測定

機器參數(shù):

主波長

505nm

反應類型

終點法

反應方向

升反應(+)

計算:Glu(mmol/L)=A測定/A標準×5

 

參考區(qū)間:健康成年人空腹葡萄糖:3.9~6.1mmol/L(70~110mg/dl)

備注:Glu標準(5mmol/L)=90mg/dl

性能指標:

外觀

無色至淡黃色澄清液體

線性范圍

0~30mmol/L,r>0.990

變異系數(shù)

批內(nèi)<2~5%,批間<5%

空白吸光值

<0.2(1cm光徑)

穩(wěn)定性

密閉,6個月

注意事項:

1、配制好的GOD-POD工作液,4℃避光保存,1月有效;低溫試劑避免反復凍融,以免失效或效率下降。

2、測定標本用血清或以草酸鉀-氟化鈉抗凝的血漿(可抑制葡萄糖的分解),可直接用于檢測腦脊液中的葡萄糖含量;待測樣品如不能及時測定應置于2~8℃保存,3天內(nèi)穩(wěn)定。

3、尿葡萄糖目前多采用此法進行定量測定,但不能直接檢測,需先用班氏法對尿液樣品做半定量試驗,按測出的大概含量,用蒸餾水稀釋尿液使葡萄糖含量在3mg/ml以下,再進行檢測,計算結果乘以稀釋倍數(shù)即可,因為未經(jīng)處理的尿液中尿酸等還原性物質的濃度較高,影響過氧化物酶反應,可能會造成結果假性偏低。

4、隨著時間的延長,低濃度樣品亦會顯紅色,所以15min后應及時檢測,時間不宜過久。

5、采用酶標儀未調零情況下雅吉生物空白參考范圍在0.04~0.09之間,5mmol/L標準參考范圍在0.25~0.45之間,由于儀器設備、操作方法等不同,參考范圍會有差異。

6、該試劑盒測定下限為0.1mmol/L,測定上限為30mmol/L;以肉眼觀察,濃度≤

0.6mmol/L幾乎呈無色,濃度在0.7mmol/L即可顯淡紅色,濃度≥2.5mmol/L可顯紅色,一般情況下接近上限比接近下限更準確。

7、本法線性范圍可達30mmol/L,如果樣品葡萄糖濃度過高,結果可能呈假性降低,應用生理鹽水或PBS等稀釋后重測,結果乘以稀釋倍數(shù)。

 

有效期:6個月有效。


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