細胞名稱：WM239a人黑色素瘤細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的 辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后

放到超凈臺內嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據,不提供照片默認收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞

消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細胞轉入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉入液氮罐中。C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

售后條款:

1.）細胞出現問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標準是什么?

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā);

2. 細胞污染問題,請在收到產品48小時內,給我們提出真實的實驗結果,核實后重發(fā);

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后,絕大多數細胞未存活,(需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片),重發(fā);

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,出現污染,重發(fā);

5. 活率問題,請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,核實后予重發(fā);

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的,并跟技術人員溝通的,由技術人員判定為我方責任的,重發(fā)。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

2）.細胞出現問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?

1. 客戶造成細胞污染,不重發(fā);

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

4. 細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);

5. 細胞培養(yǎng)時經其它處理的,不重發(fā);

6. 細胞收到2天內,未告知,不重發(fā);

7. 視具體情況而定。

YS1990CBEP2D人支氣管上皮細胞

YS1991CCLL人慢性淋巴細胞白血病細胞

YS1992C16HBE人支氣管上皮樣細胞

YS1993CEC109人食管癌細胞

YS1994CEBC-1人肺鱗癌細胞

YS1995CC26小鼠結腸癌細胞

YS1996CHLEpiC人晶狀體上皮細胞

YS1997CPC-3M-2B4人低轉移前列腺癌細胞

YS1998CAC16人心肌細胞

YS2000CSol8小鼠骨骼肌肌肉母細胞

YS2001CJ45.01人急性T細胞白血病細胞

YS2002CS16大鼠施旺細胞

YS2003CKG-1人急性髓系白血病細胞

YS2005CSUIT-2人胰腺癌細胞

YS2006CTK-1小鼠T淋巴瘤細胞

YS2007CMC/9小鼠肥大細胞

YS2008CPBL人外周血淋巴細胞

YS2009CD10.G4.1小鼠Th2型T淋巴細胞

YS2011CMKN7人胃癌細胞

YS2012CHT-3人子宮頸癌細胞

YS2013CZR-75-30人乳腺癌細胞

YS2014ChASMC人氣道平滑肌細胞

YS2015CKM-H2人霍奇金淋巴瘤細胞

YS2016CDHBE人支氣管上皮病變細胞

YS2017CMBVP小鼠腦血管周細胞

YS2018CWILL-2人B細胞淋巴瘤

YS2019CNOMO-1人白血病細胞

YS2020CM-1小鼠腎集合管細胞

YS2021CSJCRH30[RC13,RMS13,SJRH30]人骨髓橫紋肌肉癌細胞

YS2022CAKR小鼠食管癌細胞

YS2023CRGE大鼠腎小球內皮細胞

YS2024C8505C人甲狀腺癌細胞

YS2025CC8161人黑色素瘤細胞

YS2026CSBC-3人小細胞肺癌細胞

YS2027CRPMI-7951人黑色素瘤細胞

YS2028CJHH-7人肝癌細胞

YS2029CEMT-6小鼠乳腺癌細胞

YS2030CHDMEC人皮膚微血管內皮細胞

YS2031CHCO人顱骨成骨細胞

YS2032CBIC-1人食管腺癌細胞

YS2033CHPF人肺成纖維細胞

YS2034CNKL人NK細胞

YS2035CM2-10B4小鼠骨髓纖維原細胞

YS2036CL428人霍奇金淋巴瘤細胞

YS2037ChTERT-HPNE人胰腺導管上皮細胞

YS2038CHDLM-2人霍奇金淋巴瘤細胞

YS2039CAHH-1人外周血額B淋巴細胞

YS2040CLTEP-sm人小細胞肺癌細胞

YS2041CRPMI1788人外周血B淋巴細胞

YS2042CNCI-H727人肺支氣管腫瘤細胞

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