細(xì)胞名稱：RMSC-bmWistar大鼠骨髓MSC細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無(wú)血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代:如果未超過(guò)80%匯合度時(shí),將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),

1)對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞

消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25瓶),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細(xì)

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無(wú)血清凍存液(貨號(hào):C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時(shí)以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過(guò)渡培養(yǎng)（后期對(duì)比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)的一大優(yōu)勢(shì)在于能夠控制細(xì)胞繁殖的物理化學(xué)環(huán)境（即溫度、pH值、滲透壓、O2和CO2張力）和生理環(huán)境（即激素和營(yíng)養(yǎng)濃度）。除溫度外，培養(yǎng)環(huán)境由生長(zhǎng)培養(yǎng)基控制。雖然細(xì)胞培養(yǎng)的生理環(huán)境不如其物理化學(xué)環(huán)境明確，但是通過(guò)更好地了解血清成分、確定增殖所需的生長(zhǎng)因子以及更好地了解培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)胞微環(huán)境（即細(xì)胞間相互作用、氣體擴(kuò)散、細(xì)胞-基質(zhì)相互作用），現(xiàn)在可以采用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行一些細(xì)胞系的培養(yǎng)。

YS2504C人肺成纖維細(xì)胞

YS2505C人皮膚成纖維細(xì)胞

YS2506C人十二指腸腺癌細(xì)胞

YS2507C人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

YS2508CEBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞（彝族）

YS2509C人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞

YS2510C人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

YS2511C人腦瘤細(xì)胞

YS2512C人皮膚黑色素瘤細(xì)胞

YS2513C人肺癌腺癌細(xì)胞

YS2514C人甲狀腺正常細(xì)胞

YS2515C甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株

YS2516C人T淋巴細(xì)胞白血病

YS2517C人視網(wǎng)膜周細(xì)胞-

YS2518C人口腔角質(zhì)細(xì)胞-

YS2519C大鼠表皮角質(zhì)細(xì)胞(新生)-

YS2520C人胃癌細(xì)胞

YS2521C人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞-

YS2522C人骨骼肌成肌細(xì)胞-

YS2523C人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞-

YS2524C人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞-

YS2525C人小膠質(zhì)細(xì)胞

YS2526CMR1[derivativeofHB-11048]中國(guó)倉(cāng)鼠X小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤

YS2527C敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞2n=42

YS2528C敘利亞倉(cāng)鼠胰島β細(xì)胞

YS2529CPC-12大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞（未分化）

YS2530C大鼠肝癌細(xì)胞系

YS2531C大鼠腎小球系膜細(xì)胞EC

YS2532C大鼠乳腺腺癌細(xì)胞系

YS2533C大鼠胰島細(xì)胞

YS2534C大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞

YS2535CRMSC-bmWistar大鼠骨髓MSC細(xì)胞Wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

YS2536CRMSC-bmSD大鼠骨髓MSC細(xì)胞

YS2537C大鼠胰島素瘤細(xì)胞INS-1

YS2538C大鼠/小鼠神經(jīng)元融合細(xì)胞

YS2539C大鼠肝星狀細(xì)胞

YS2540C大鼠小腸引窩上皮細(xì)胞

YS2541C黑化大家鼠肺成纖維細(xì)胞

YS2542C大鼠胚肌細(xì)胞

YS2543C大鼠胚皮膚成纖維細(xì)胞

YS2544C大鼠皮膚成纖維細(xì)胞

YS2545C大鼠血管平滑肌細(xì)胞

YS2546C小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞株

YS2547C鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞株

YS2548C小鼠雜交瘤細(xì)胞

YS2549C小鼠腫瘤細(xì)胞系

YS2550C小鼠乳腺癌細(xì)胞系

YS2551C小鼠成纖維細(xì)胞系

YS2552C小鼠黑色素瘤細(xì)胞系

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