細胞名稱：小鼠胚胎干細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞

消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細胞轉入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉入液氮罐中。C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的 辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后

放到超凈臺內嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據(jù),不提供照片默認收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

YS2555CTM4小鼠睪丸支持細胞

YS2556CL-929小鼠胚胎成纖維細胞

YS2557CMC3T3-E1subclone14小鼠胚胎成骨細胞

YS2558CNIH/3T3小鼠胚胎成纖維細胞

YS2559CNOR-10小鼠骨骼肌成纖維細胞

YS2560CSo18小鼠骨骼肌成肌細胞

YS2561C鼠纖維肉瘤細胞系

YS2562CB16-F10小鼠黑色素瘤高轉細胞

YS2563CH22小鼠肝癌細胞系

YS2564C小鼠B細胞雜交瘤細胞

YS2565C逆轉錄病毒包裝的NIH3T3細胞

YS2566C鼠肝癌細胞

YS2567C鼠腹水瘤細胞

YS2568C鼠胚成纖維細胞

YS2569C鼠腹水單核細胞瘤

YS2570C鼠小腦細胞

YS2571C小鼠IL-3依賴性細胞

YS2572C逆轉錄酶病毒包裝細胞

YS2573C小鼠淋巴結血管上皮樣細胞

YS2574C小鼠雜交瘤細胞PTA-1626

YS2575C鼠B淋巴瘤細胞系

YS2576C雜交瘤細胞

YS2577C鼠B淋巴細胞系

YS2578C艾氏腹水癌細胞

YS2579C小鼠骨髓纖維原細胞

YS2580CNeuro-2a[N2a;Neuro-2a]小鼠腦神經(jīng)瘤細胞

YS2581CGFP標記的小鼠子宮頸癌細胞

YS2582C小鼠正常肝細胞

YS2583C抗鼠CD4單克隆細胞

YS2584C抗鼠CD8單克隆細胞

YS2585COSKMZ-1小鼠誘導型多能干細胞

YS2586CC57BL/6小鼠胚胎干細胞

YS2587CEDJ#22小鼠胚胎干細胞

YS2588CESF158小鼠胚胎干細胞

YS2589CR1小鼠胚胎干細胞

YS2590CRW.4小鼠胚胎干細胞

YS2591CNanog-GFP小鼠胚胎干細胞

YS2592COSKM-1小鼠誘導型多能干細胞

YS2593CCE3小鼠胚胎干細胞

YS2594CJ1小鼠胚胎干細胞

YS2595COSK-1小鼠誘導型多能干細胞

YS2596COSKZ-1小鼠誘導型多能干細胞

YS2597COct4-Neo小鼠胚胎干細胞

YS2598CCF-1MEFCF-1小鼠胚胎成纖維細胞，經(jīng)射線處理，P3,100萬細胞

YS2599CMEF昆明白小鼠胚胎成纖維細胞

YS2600CMEF昆明白小鼠胚胎成纖維細胞，經(jīng)mitomycin-C處理，P3,300萬細胞

YS2601CMEF昆明白小鼠胚胎成纖維細胞，經(jīng)射線處理，P3,300萬細胞

YS2602CG418-RMEF抗性的小鼠胚胎成纖維細胞，經(jīng)射線處理，P3,300萬細胞

YS2603CMEF昆明白小鼠胚胎成纖維細胞，經(jīng)射線處理，P3,100萬細胞

YS2604CG418-RMEF抗性的小鼠胚胎成纖維細胞

YS2605CG418-RMEF抗性的小鼠胚胎成纖維細胞，經(jīng)mitomycin-C處理，P3,300萬細胞

YS2606CCF-1MEFCF-1小鼠胚胎成纖維細胞

YS2607CAB2.2小鼠胚胎干細胞

更多細胞歡迎咨詢我們：小鼠胚胎干細胞ATCC