細胞名稱：小鼠成纖維細胞L Wnt-3AATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？細胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。實際上，連續(xù)細胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。

1、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)加倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經(jīng)驗才能開始正常人類細胞培養(yǎng)？推薦有經(jīng)驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養(yǎng)的初學者或打算建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養(yǎng)專家。

售后服務(wù)告知書

1）細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS4153C人急性骨髓性白血病細胞KG-1

YS4154C人彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞Toledo

YS4155C人淋巴瘤細胞BC-3

YS4156C人黑色素瘤細胞MeWo

YS4157C人T淋巴瘤細胞SUP-T1

YS4158C人食管上皮細胞Het-1A

YS4159C人乳腺癌細胞AU565

YS4160C人成神經(jīng)瘤細胞-骨髓SK-N-DZ

YS4161C人乳腺上皮細胞DU4475

YS4162CALK 陽性間變性大細胞淋巴瘤SU-DHL-1

YS4163C人肺腺鱗癌細胞NCI-H596

YS4164C人乳腺導(dǎo)管癌細胞BT-483

YS4165C人乳腺導(dǎo)管癌細胞HCC1500

YS4166C人盲腸癌細胞LS411N

YS4167C人細支氣管肺泡癌細胞NCI-H1781

YS4168C人非小細胞肺癌細胞NCI-H1581

YS4169C人卵巢癌細胞UWB1.289+BRCA1

YS4170C人大腦內(nèi)皮細胞HBEC-5i

YS4171C人多發(fā)性骨髓瘤細胞HuNS1

YS4172C人支氣管上皮樣細胞HBE135-E6E7

YS4173C人肺微血管內(nèi)皮細胞HULEC-5a

YS4174C彌漫型大b細胞淋巴瘤細胞DB

YS4175C源于293，包病毒做轉(zhuǎn)錄，兩性轉(zhuǎn)錄2A

YS4176C人卵巢透明細胞癌細胞ES-2

YS4177C人胚肺成纖維細胞MRC-5

YS4178C人B細胞非霍奇金淋巴瘤細胞RL

YS4179C人脾細胞MD

YS4180C人B淋巴瘤細胞RC

YS4181C人主動脈內(nèi)皮細胞TeloHAEC

YS4182C小鼠皮下結(jié)締組織細胞L-WRN

YS4183C小鼠小腸內(nèi)分泌細胞系STC-1

YS4184C人胚腎細胞293T/17 SF

YS4185C小鼠腎系膜細胞RMC

YS4186C小鼠腎小管上皮細胞TCMK-1

YS4187C大鼠正常腎成纖維細胞NRK-49F

YS4188C正常人腸上皮細胞HIEC-6

YS4189C人纖維肉瘤細胞SW 684

YS4190C人逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細胞系Phoenix-ECO

YS4191C人舌鱗狀細胞癌BICR3

YS4192C人食管癌細胞OE19

YS4193C人結(jié)直腸腫瘤成纖維細胞CAF05HUMAN COLORECTAL TUMOR CAFS（CAF05）

YS4194C小鼠結(jié)腸癌細胞 CT26.WT

YS4195C小鼠成纖維細胞NCTC clone 929

YS4196C小鼠成纖維細胞L Wnt-3A

YS4197C大鼠甲狀腺髓樣癌細胞CA-77

YS4198C小鼠血管內(nèi)皮瘤細胞EOMA

YS4199C小鼠惡性乳腺癌細胞Py230

YS4200C人胃癌細胞SNU-620

YS4201C人胃癌細胞SNU-601

YS4202C鱗狀細胞癌，扁平上皮癌細胞SNU-1066

YS4203C鱗狀細胞癌，扁平上皮癌細胞SNU-46

YS4204C人黑色素瘤細胞MNT-1

YS4205C小鼠胚胎成纖維細胞3T3-L1

YS4206C穩(wěn)定表達RspoI蛋白的293T細胞HA-R-Spondin1-Fc 293T cells

YS4207C霍奇金淋巴瘤細胞Hs 611.T

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