ssDNA/RNA環(huán)化連接酶試劑為熱穩(wěn)定的DNA/RNA連接酶，不依賴于ATP，可催化單鏈DNA或單鏈

RNA的分子內(nèi)環(huán)化。環(huán)化反應(yīng)中，要求催化底物單鏈DNA/RNA具有5’-磷酸基團(tuán)和3’-OH基團(tuán)。對于大于15nt的單鏈底物，

該酶均能高效的連接。

組分

組分名稱數(shù)量

ssDNA/RNA CircLigase (100 U/μl)20 μl/200 μl

10×CircLigase Buffer500 μl

50 mM MnCl2250 μl

活性定義

65°C 1h條件下，催化1pmol 5’-磷酸化的ssDNA底物環(huán)化，所需的酶量定義為1U。

儲存

-20℃可保存3年。

ssDNA/RNA環(huán)化連接酶試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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